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Isolation
Spiroleptosphol B
Leptosphaeria. doliolum
PS培地5L、２５℃、２週間振トウ培養
1H
HO
O OH
H3C
菌体
MeOH抽出
残査
謝辞
NMR スペクトル (CDCl3)
O
培養液
NOE
H
O
O
CH3
H3C
CH3
HO
・EIMSを測定して頂きました北海
道大学農学研究科川端準教授、
福士江里博士に感謝いたします。
H
H
O
H
8.4 Hz
O
H
OH
・細胞毒性活性を測定して頂きま
した弘前大学三浦富智準教授に
感謝いたします。
CH3
MeOH抽出物
濃縮
Leptosphaeria doliolum
ヨモギ茎より分離した子のう菌
・Ｘ線結晶解析をして頂きました宇
都宮大学農学研究科二瓶賢一準
教授に感謝いたします。
AcOEt / H2O
水層
AcOEt抽出物
(1.0 g)
SiO2カラム (MeOH / CH2Cl2)
1% MeOH
BuOH / H2O
BuOH抽出物
(150 mg)
15% MeOH
(280 mg)
5% MeOH
230 mg
spiroleptosphol
Leptospholic acid
水層
Sep-Pak ODS (H2O→MeOH)
細胞毒性活性
EC50 = 20 ug / mL
(P388)
MeOH 70%
(20 mg)
MeOH 60%
(280 mg)
ODS (中圧カラム)
32 % MeCN / H2O
spiroleptosphol B
(92 mg)
HPLC : Waters SunFireTM
20 % MeCN / H2O
H3C
OH
H3 C
O
HO
HO
O
平衡混合物
OH
CH3
HO
O
rt. 4days
CH3
O
H
spiroleptosphol Bに分解
CH3
CH3
HO
CH3
CH3
1H
leptospholic acid
(18 mg)
spiroleptosphol C
(65 mg)
CDCl3
OH
R
HO
O OH
H3C
OH
O
O
NMR スペクトル (CDCl3)
ESIMS : m/z = 355
[C19H30O6+H]+
after 4days
1H NMR スペクトル
(CD3OD)
norleptosphol C (16 mg)
Spiroleptosphol
H
89.1
157.1
EIMS : m/z = 336.1905
[C19H28O5]+
H
H5.16
OH
O
174.6
68.7
O
HO
NOE相関
4.68, 4.80
(R)
58.7
H 3.45
H H
(R)
2.16 20.9
0.91
124.3 H
72.2 (R) 39.0
CH3
3.84 H (R)
19.0
(R) 70.0
129.8
34.3 H 1.32 0.80
4.40 H
CH3
(R)
H 141.7
43.9
127.7 5.58 H
31.6
HO
11.9
5.43
(R)
29.8 0.85
H
H
O
Norleptoshol C
Spiroleptosphol C
R
OH
ESIMS : m/z = 327
[C18H30O5+H]+
O
10.6 Hz
H
O
CH3
H
0.98, 1.24
H
H OBz
CH2
HO
HO
H 5.33
5.75
NMRスペクトルはブロード
(CDCl3, CD3OD, acetone)
NOE
H
10
11
H3C
H
5
3
1.11, 1.28
HO
H
8.1 Hz
6
4
H
HO
OH
7
H
10.6 Hz
立体化学
O
O
BzO
BzCl, Py
spiroleptosphol
CDスペクトル
CH2
O
HO
CH3
O
BzCl, Py, DMAP
CH3
CH3
HO
H
OH
O
BzO
60Ž , 14h
CH3
H
Biosynthesis of Spiroleptosphol
CH3
安定同位体ラベル実験
CH3
BzO
CH3
CH3
側鎖部位の絶対立体化学
spiroleptosphol
NMR スペクトル (CDCl3)
CH3
NOE
H
OH
1H
CH3
PtO2/C, H2
MeOH, 12h
CH3
H
d, 6.3 Hz
NMR スペクトル (CD3OD)
OBz
BzO
O
1H
1) O3
(R)
(R)
O
O
HO
キラルGC-MS
OH
2) NaBH4
51.7
lower incoporation
52.3
methionoine
OH
42.8
42.2
HO
天然物
OH
(S)
(S)
(R)
(R)
2
34.9
35.2
JCC (Hz)
S, S体
OH
42.4
68.0
R, R体
White, j. D. et. al (1994)
ラセミ体
OH
培養１０日目に各ラベル
化合物を培地に添加。
10 mg / flask
OH
カラム : (RESTEC Rt-βDEXm™, 30 m, 0.25 mm ID) 75°
Stereochemistry of Similar Spiro Metabolites from Fungi
CH2
O
O
HO
6
7
HO
3
5
4
10
OH
R
compounds
C4
C5
C6
C7
C10
spiroleptosphol
R
R
R
R
R
(3R,5R)-(E)-3,5dimethylhept-1-en-1-yl
-
(E,E)-3,5-dimethylhepta1,4-dien-1-yl
-
-
R
producers
OH
Leptosphaeria doliolum
oxaspirol
-
-
arthropsolide D
S
R
S
S
S
(E)-but-2-en-1-yl
Arthropsis truncata
oxaspirodion
-
-
S*
keto form
S*
(E)-but-2-en-1-yl
Chaetomium subspirale
Rhodotorula glutinis T-110
paecilospirone
S*
R*
S*
keto form
S*
(E)-but-2-en-1-yl
Paecilomyces sp.
massarigenin A
S*
S*
R*
S*
R*
methyl
Massarina tunicata
mycosporulone
keto form
S*
R*
keto form
S*
methyl
Coniothyrium sporulosum
6-epi-5’-hydroxymycosporulone
S*
R*
R*
keto form
R
methyl
Microsphareopsis sp. FO5050Ⅳ
rosigenin
S*
R*
R*
keto form
S*
methyl
Mycospharella rosigena
O
Acetyl-CoA
S-Enz
Enz-S
O
O
HO
O
O
脱炭酸
O
TCA
cycle
O
O
O
HO
O
heptaketide
O
O
O
HO
HO
Me
HO
Me
CH3
OH
OH
CH3
CH3
CH3