1. No category

薬物代謝酵素阻害試験
被験物質が薬物代謝酵素に与える影響をヒト肝ミクロソームや発現酵素を用
いたin vitro 系で評価します。IC50およびKi値の算出や時間依存的阻害作用
の評価を実施します。
酵素源
• ヒト肝ミクロソーム，各種発現酵素（CYP、FMO、UGT等）
測定方法
• LC/MS、LC/MS/MS、HPLC（UV、蛍光、ラジオアイソトープ）
評価酵素
Typical metabolite reaction
Enzyme
CYP1A2
Phenacetin O-deethylation
UGT
CYP2A6
CYP2B6
Enzyme
CYP
Typical metabolite reaction
UGT1A1
Estradiol 3 β-glucuronidation
Coumarin 7-hydroxylation
Bupropion hydroxylation
UGT1A4
UGT1A6
Estradiol 17 β-glucuronidation
1-Naphthol β-D-glucuronidation
CYP2C8
Paclitaxel 6α-hydroxylation
Amodiaquine N-deethylation
CYP2C9
Diclofenac 4’-hydroxylation
CYP2C19
(S)-Mephenytoin 4’-hydroxylation
UGT1A9
UGT2B7
FMO3
DPD
Propofol glucuronidation
AZT β-D-glucuronidation
Benzydamine N-oxidation
Dihydropyrimidine dehydrogenation
CYP2D6
Bufuralol 1’-hydroxylation
Others
その他の酵素活性については、ご相談ください。
Dextromethorphan O-demethylation
CYP2E1
Chlorzoxazone 6-hydroxylation
CYP3A4/5
Midazolam 1’-hydroxylation
Testosterone 6β-hydroxylation
Nifedipine N-oxidation
CYP4A11
Lauric acid 12-hydroxylation
代謝阻害に関する相互作用の評価
• 市販医薬品との代謝に関する相互作用を評価致します。
•被験物質が市販医薬品に及ぼす影響
•被験物質が市販医薬品から受ける影響
• 市販医薬品の代謝活性測定法について調査、確立から実施しております。
方法
NADPH生成系
Direct inhibition (DI)
インキュベーション
予備加温
基質の代謝反応
開始
(緩衝液，ミクロソーム，
被験物質，基質)
基質の代謝反応
停止
Time-dependent inhibition (TDI)
・希釈法
・非希釈法
被験物質をミクロソームとプレインキュベーション
基質
NADPH生成系
NADPH生成系
プレインキュベーション
予備加温
インキュベーション
プレインキュベーション
予備加温
一部を移す
(緩衝液，ミクロソーム，被験物質)
基質の代謝反応
開始
基質の代謝反応
停止
(緩衝液，ミクロソーム，被験物質）
プレインキュベートされたミクロソームと基質をインキュベーション
予備加温
(緩衝液，NADPH生成系，基質)
結果
インキュベーション
基質の代謝反応
開始
IC50
CYP2D6 (Bufuralol 1'-hydroxylation)
120
120
100
100
Remaining activity (%)
Remaining activity (%)
CYP2C9 (Diclofenac 4'-hydroxylation)
80
60
40
20
0
0.01
0.1
1
10
○: Direct inhibition,
●: Time-dependent inhibition
(非希釈法：30 min pre-incubation)
80
60
40
20
0
0.01
0.1
Tienilic acid (μmol/L)
1
10
Paroxetine (μmol/L)
Inhibition parameters (Ki) − DI −
CYP2C8 (Amodiaquine N-deethylation) vs Montelukast
・Dixon plot
・Michaelis-Menten plot
1/v
10
1.2
8
1
6
0.8
0.6
4
0.4
2
0.2
0
-0.2
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
0
1
2
3
4
5
6
Amodiaquine (umol/L)
7
Montelukast (μmol/L)
Inactivation parameters (KI, kinact) − TDI −
CYP3A4 (Midazolam 1’-hydroxylation) vs Verapamil
LN (% of control)
5
0.03
0.02
4
0.01
3
0
0
10
20
Pre-incubation time (min)
30
0
5
10
15
Verapamil (umol/L)
20
8
基質の代謝反応
停止