128 KB - Sigma
じっけんレシピ 〒140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 天王洲セントラルタワー4Ｆ Tel: (03) 5796-7330 Fax: (03) 5796-7335 e-mail: [email protected] 金ナノ粒子、金コロイド実験プロトコール タンパク質（抗体、DNAなど）の金コロイド標識 クエン酸安定化金ナノ粒子は、表面静電気相互作用または疎水相互作用によりタンパク質と容易に結合します。 コンジュゲーションするタンパク質の量が少ない場合や pH が適正でない場合において、電解質やバッファー添加時に金 ナノ粒子の凝集が生じることがあります。このため事前に最適な pH と金ナノ粒子を安定化するのに十分なタンパク質コン ジュゲーション量を定量する必要があります。（方法①をご参照ください。） 界面活性剤の入っている金ナノ粒子の場合、その影響でタンパク質の吸着が起こりにくくなる場合があります。この理由 から、コンジュゲーションされる場合は、reactant free（PBS 安定化タイプ）のものをお勧めしております。 表１： クエン酸安定化金ナノ粒子分散液製品一覧 Cytodiagnostics 社の製品です。 Cat No. 752568 752584 753610 753629 753645 753661 753688 753637 753653 777099 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 製品名 5 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 10 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 20 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 30 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 50 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 80 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 100 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 40 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 60 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS 15 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS reactant reactant reactant reactant reactant reactant reactant reactant reactant reactant 741949 741957 777137 741965 741973 741981 742007 742015 742023 742031 742066 742074 742082 742090 742058 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 金ナノ粒子 5 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 10 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 15 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 20 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 30 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 40 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 50 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 60 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 80 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 100 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer 200 nm diameter, stabilized suspension in citrate buffer 250 nm diameter, stabilized suspension in citrate buffer 300 nm diameter, stabilized suspension in citrate buffer 400 nm diameter, stabilized suspension in citrate buffer 150 nm diameter, stabilized suspension in citrate buffer Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary Proprietary 2014/12/18 お問い合わせ先： 製品の技術的なご質問 価格・在庫のご質問 備考 free free free free free free free free free free surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant surfactant [email protected] [email protected] じっけんレシピ 〒140-0002 東京都品川区東品川 2-2-24 天王洲セントラルタワー4Ｆ Tel: (03) 5796-7330 Fax: (03) 5796-7335 e-mail: [email protected] タンパク質の金コロイド標識方法 ①飽和コンジュゲーション量定量手順： 1. 250uL の金コロイド分散液を 1.5mL のチューブに入れる。 2. 金コロイドの pH を、コンジュゲーションするタンパク質の等電点（pI）に合わせる。 3. 様々な濃度のタンパク質（0～1mg protein in 25uL）を調整し、金コロイド液中に添加する。 4. 室温で 10-15 分程度インキュベーションする。 5. 10%NaCl 溶液 250uL を添加し、金の凝集が起こらないタンパク質濃度を確認する。（凝集は色変化（目視）、また は吸光度変化によって確認できます。） ②金-タンパク質コンジュゲーション手順： 1. 必要量の金コロイド分散液を用意し、新しいチューブに入れる。 2. ①で定量したタンパク質量の 10％程度過剰量を金コロイド分散液１に加える。 3. 室温で 30 分程度撹拌しながらインキュベーションする。 4. 遠心分離した後、上澄みを取り除く。（遠心分離の条件は表２参照） 5. PBS を 0.1％BSA または 1％PEG とともに加え、金コロイドを再分散する。 6. 使用時まで 4℃で保存する。 表２： 遠心分離の条件 *Cytodiagnostics 社 HP より引用 金ナノ粒子の電顕（TEM）グリッドサンプルの調製方法 TEM グリッドサンプルの調製手順： 1. 10%BSA 1XPBS バッファー溶液に TEM グリッドを 10min 浸漬し、グリッドを BSA でコートする。 2. TEM グリッドを脱イオン水で数分洗浄する。 3. 金コロイド溶液にグリッドを 10min 浸漬し、金粒子を BSA に結合させる。 4. グリッドを脱イオン水で洗浄後乾燥させる。 741949 金ナノ粒子 5 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in citrate buffer -> A) 753688 金ナノ粒子 100 nm diameter, OD 1, stabilized suspension in 0.1 mM PBS, reactant free-> B) 742090 金ナノ粒子 400 nm diameter, stabilized suspension in citrate buffer -> C) 2014/12/18 お問い合わせ先： 製品の技術的なご質問 価格・在庫のご質問 [email protected] [email protected]
© Copyright 2024