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結核感染診断検査Ｔ-スポット(R).ＴＢについて
～特徴、測定方法、結果判読～
◎藤本 一満 1)
ファルコバイオシステムズ総合研究所 1)
結核発病ﾘｽｸが高い者および発病後感染拡大ﾘｽｸが高
い者に対する潜在性結核感染症(LTBI)の治療の有効性
が確立し、結核感染診断の重要性は増した。LTBI の
絶対基準がないため、LTBI に対して感度、特異度は
直接推測することはできないが、従来、結核感染診断
方法として行われてきたツ反は過去の BCG 接種や非
結核性抗酸菌等の影響を受けるため特異度に問題があ
った。これに対して結核特異抗原の刺激によって
ﾘﾝﾊﾟ球から遊離されるｲﾝﾀｰﾌｪﾛﾝ-γ(IFN-γ)を測定する
IFN-γ 遊離試験（IGRA）は、高特異度、信頼できる
客観的な測定法、被験者の再診不要等からツ反に比べ
有利な点をもつ。現在、IGRA として 2009 年に
ｸｫﾝﾃｨﾌｪﾛﾝ®TB ｺﾞｰﾙﾄﾞ(QFT)、2012 年に Tｽﾎﾟｯﾄ®TB(T-SPOT)が健康保険に収載され、両方法と
も広く利用されている。
今回、T-SPOT の特徴、測定方法および結果判読等に
ついて報告する。
［結核の感染と発病］
感染とは、結核菌に感染し体内に菌はいるが免疫で
封じ込まれて活動せず潜伏している状態、発病とは、
感染した後に免疫力低下、免疫抑制剤の使用などで体
の抵抗力が弱くなり、結核菌が活動し始めて体の中で
増殖している状態をいう。
［T-SPOT の特徴］
１．採血管：ﾍﾊﾟﾘﾝ血 1 本。２．採血から検査までの
時間：最大 32 時間。３．検体保存温度：18～25℃。
４．結核特異抗原：ESAT-6、CFP10 の 2 種。５．測
定対象：25 万個の末梢血単核球(PBMC)当たりの IFNγ 産生細胞数。６．検出法： ELISPOT 法。７．検査
日数：2 日。８．検査の自動化率：およそ 10%。９．
感度、特異度：感度は活動性結核患者 80 名中 78 名が
陽性 97.5%、特異度は結核感染ﾘｽｸの低い 111 名中
110 名が陰性 99.1%(試薬添付説明書より引用)。１０．
QFT との相関性：結核菌感染ﾘｽｸの高い被験者による
陽性一致率は 75/76(98.7%)、結核菌感染ﾘｽｸの低い被
験者による陰性一致率は 97/97(100.0%)。
［T-SPOT の測定方法］
１．全血から PBMC を分離し、規定の細胞数に調製
する。２．抗 IFN-γ 抗体を固相したﾏｲｸﾛﾌﾟﾚｰﾄの
4ｳｪﾙに 25 万個ずつ PBMC を分注し、ESAT-6、
CFP10 を加え 16～20 時間反応させる。３．ｳｪﾙを洗
浄したのち、ALP 標識抗 IFN-γ 抗体を加え反応させ
る。４．ｳｪﾙを洗浄して非結合の抗体を除去後、基質
試薬を加える。５．基質が分解されるとｳｪﾙ底の膜に
暗青色のｽﾎﾟｯﾄとして染みつき、IFN-γ を産生した
ｴﾌｪｸﾀｰT 細胞の存在を表す（ELISPOT 法）。６．
ｴﾘｽﾎﾟｯﾄﾘｰﾀﾞｰおよび目視確認にてｽﾎﾟｯﾄ数を計測する。
７．一定の判定基準に従い、ｽﾎﾟｯﾄ数から結核感染の
有無を判定する。
［測定結果の判定法］
１．（ESAT-6 のｽﾎﾟｯﾄ数）－（陰性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数）
を①とする。（CFP10 のｽﾎﾟｯﾄ数）－（陰性ｺﾝﾄﾛｰﾙの
ｽﾎﾟｯﾄ数）を②とする。２．陽性：①および②の両方、
あるいは片方のｽﾎﾟｯﾄ数が 6 以上の場合。陰性：①お
よび②の両方のｽﾎﾟｯﾄ数が 5 以下の場合。３．判定保
留：①および②の両方の最大ｽﾎﾟｯﾄ数が 5～7 の場合。
４．判定不可：陰性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数が 11 以上の場合。
陽性ｺﾝﾄﾛｰﾙのｽﾎﾟｯﾄ数が 20 未満の場合。
図　T-SPOT 測定結果（陽性例）
［結果分布］
当社に T-SPOT の依頼のあった 21,266 検体(2013 年
2 月～2014 年 4 月)の結果分布をみたところ、陽性
8.1%、陰性 87.3%、陽性域の判定保留 1.5%、陰性域
の判定保留 1.1%、判定不可 1.8%、PBMC 規定値未満
0.2%であった。
［まとめ］
T-SPOT は、PBMC の洗浄およぶ細胞数の調製をす
ることで安定した検査結果が得やすく、感度および特
異度が高いことから、結核感染者の特定が可能となる。
当日は、よくある質問に対する回答を紹介する。
連絡先 0774-46-1010