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慢性骨髄性白血病の微少残存白血病病変
（MRD）解析に二つの強い味方!!
ERM○R -AD623
IRMM
⇒
ReCCS から入手可!!
ERM-AD623 は、白血病に用いられる代表的なコントロール遺伝子（BCR, ABL, GUSB）に対する
BCR-ABL b3a2 転写物のコピー数比率を測定するために、定量 RT-PCR (qPCR）法のキャリブレーション
に使用することを目的とした製品です。
pIRMM0099 plasmid には、BCR, ABL1, GUSB, BCR-ABL1 遺伝子がそれぞれ 1 コピーずつ組み込まれて
おり、また、各バイアルのコピー数はデジタル PCR 法により正確な認証値、不確かさが決められているた
1)
1)
め表 、より正確な標準曲線を得ることができます。図
表 1) プラスミド溶液セット
コピー数によるプラスミド濃度 a)
認証値 [cp/µL]
○
ERM R -AD623a
6
0.11x10
6
5
0.11x10
5
4
0.10x10
4
3
0.09x10
3
1.04x10 c)
2
0.10x10
2
10.0b)
1.5
1.08x10 c)
○
ERM R -AD623b
1.08x10 c)
○
ERM R -AD623c
1.03x10 c)
○
ERM R -AD623d
1.02x10 c)
○
ERM R -AD623e
不確かさ d)[cp/µL]
○
ERM R -AD623f
a) コピー数によるプラスミド濃度は、デジタル PCR を用いて正確に決定されています。
b) 三研究施設で取られた 17 の単独測定結果の非荷重平均値で、その認証値と不確かさは国際単位系(SI)にトレーサブ
ルです。
c) 三研究施設で取られた 18 の単独測定結果の非荷重平均値で、その認証値と不確かさは国際単位系(SI)にトレーサブ
ルです。
d) この認証値は、2009 年の ISO「測定の不確かさの表現に関する指針」(GUM, 1995)、ISO/IEC 指針 98-3 に従い包
含係数 k=2 に相当する約 95％の信頼水準で推定される拡張不確かさです。
40
y = -3.3106x + 39.134
R² = 0.9998
35
Ct
30
25
20
15
10
0
2
4
6
8
Log Copies
図１）ERM623 を用いた標準曲線
Duplex Digital PCR による MRD 解析
【研究検査】
ReCCS では、Digital PCR を用いた MRD 解析を開発しました。本項目は、Digital PCR 法を用いて
慢性骨髄性白血病の major BCR-ABL1 融合遺伝子の発現量を測定します。BCR-ABL1 融合遺伝子と内部標
1)2)
準遺伝子 GUSB の発現量を同時に測定し図 、それぞれの copy 数から BCR-ABL1 /GUSB 比（%）を算出
します。Digital PCR による測定には、
もはや標準曲線を必要とせず、
また、
しばしば問題となる定量 RT-PCR
(qPCR）法の濃度による bias は認められません。従って、高精度な測定結果が得られ、正確な治療効果の
モニタリングが可能となります。
また、International Scale (IS)が 0.1％以下の場合、分子遺伝学的寛解（MMR）に達成したことを示しま
すが、さらに 0.1％以下の正確な微少残存白血病病変の検出も可能となりました。
Digital PCR 法は、対象サンプルを 1 ウェル当たり 1 分子になるように多くのウェルに分配して、個々に
PCR を行い各ウェルでの増幅の有無を検出します。そして、ポアソンモデルにより複数コピーの分配を補
3)
正して図 、シグナルのあるウェル数をターゲットのコピー数として直接的に算出する方法です。
1.40E+06
1.29E+06
1.20E+06
Copies/µl
1.00E+06
7.56E+05
8.00E+05
6.00E+05
4.00E+05
2.00E+05
0.00E+00
FAM
VIC
図 1）Cell line K562 の BCR-ABL1、GUSB 遺伝子の発現量
図 2）Digital PCR Chip 上の蛍光シグナル
%陽性反応
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
平均コピー数/ウェル
図 3）ポアソン分布
お問合せ先：一般社団法人 検査医学標準物質機構 新江田基準測定施設
〒225-0012 神奈川県横浜市青葉区あざみ野南 1 丁目 3-3
【技術 内容】TEL:045-507-6916 FAX:045-507-7197
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