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ペプチドワクチン投与を受けた健常例およびCML例における
抗原ペプチド特異的T細胞受容体（TCR）レパトワの解析
新潟大学医学部保健学科検査技術科学専攻4年　M13D942H　白井竜二
目 的
本研究室ではMLPC法（混合リンパ球ペプチド培養法）を用
いて、体内に存在するCTL（細胞傷害性T細胞）を１個から増
幅して解析し、 MLPC法がCTLの頻度測定および機能解析
において極めて有用であることを報告してきた。 本研究では、WT1ペプチドワクチン施行例におけるWT1ペプ
チドに特異的なCTLのTCR Vβ（T細胞受容体β鎖可変領域）
レパトワのクローナリテイを解析するため、MLPC法とFACSを
用いて、TCR Vβレパトワの検討を行った。
T細胞受容体(TCR) CD8+T細胞
Vβ
Jβ
Vβ1～
Jβ1～
TCR
MHCクラスⅠ
抗原ペプチド
抗原提示細胞
Dβ
TCRのα鎖β鎖には、それぞれ定常
Dβ1～
α1
部と可変部がある。
この可変部が提示される様々な抗
原ペプチドをMHC分子を介して認
識する。
Ｄ
T細胞受容体
抗原認識部
抗原ペプチドに対する特異性を決
定しているのが可変部の3つの相
補性決定領域（CDR）である。
特に3つ目のCDR3が結合に大きく
関わっている。その抗原認識部で
は、VDJ可変部遺伝子の再構成や
塩基の挿入や欠失が生じる。その
結果、膨大な抗原を認識し得る
多様性を獲得する。
結果1
ペプチド投与を受けた健常例における
ペプチド特異的TCRVβ
0
Vb 1
Vb 2
Vb 3
Vb 4
Vb 5.1
Vb 5.2
Vb 5.3
Vb 7.1
Vb 7.2
Vb 8
Vb 9
Vb 11
Vb 12
Vb 13.1
Vb 13.2
Vb 13.6
Vb 14
Vb 16
Vb 17
Vb 18
Vb 20
Vb 21.3
Vb 22
Vb 23
% Vβ usage in
CD8+ lymphocytes
WT1ペプチド投与を受けた健常例の末梢血CD8＋T細胞 15
10
5
TCR Vβ
健常例におけるMLPC2週目のWT1テトラマー解析結果
mWT1 tetramer-PE
035 MT B2.035
100
FITC-CD8
036 MT B3.036
104
040 MT B7.040
100
FITC-CD8
FITC-CD8
104
FITC-CD8
104
100
FITC-CD8
104
100
FITC-CD8
100
FITC-CD8
038 MT B5.038
104
042 MT B9.042
104
046 MT C3.046
050 MT C7.050
100
FITC-CD8
041 MT B8.041
045 MT C2.045
100
100
037 MT B4.037
100
FITC-CD8
100
FITC-CD8
104
100
FITC-CD8
104
104
100
FITC-CD8
104
048 MT C5.048
104
051 MT C8.051
104
FITC-CD8
043 MT B10.043
047 MT C4.047
104
100
039 MT B6.039
CD8-FITC
100
FITC-CD8
100
FITC-CD8
104
044 MT B11.044
100
FITC-CD8
104
049 MT C6.049
104
100
FITC-CD8
104
WT1ペプチド投与を受けた健常例のMLPC後の
テトラマー陽性well中のCD8+細胞のレパトワ解析
D3 well
mWT1-tetramer
mWT1-tetramer
21.3%
(/ CD8+ T cells)
Vb5.3
0.00
Vb9
0.00
Vb7.1
0.84
Vb3
0.00
Vb5.2
CD8
CD8
0.00
Vb2
96.1
Vb18
0.00
Vb16
0.00
Vb23
0.00
Vb12
0.00
Vb17
0.52
Vb1
1.07
Vb5.1
0.51
Vb20
0.00
Vb11
0.00
Vb21.3
0.00
WT1特異的TCRの
96.1％がVβ2を使用
Vb22
2.11
Vb14
0.00
Vb13.1
Vb13.6
1.68
0.84
Vb8
0.00
Vb4 Vb13.2
0.00
0.44
Vb7.2
0.00
WT1ペプチド投与を受けた健常例のMLPC後の
テトラマー陽性well中のCD8+細胞のレパトワ解析
D3 well
mWT1-tetramer
21.3%
(/ CD8+ T cells)
CD8
average + 1SD : 23.5
結果2
ペプチドワクチンを受けたCML例における
ペプチド特異的TCRVβ
Vb1
Vb2
Vb3
Vb4
Vb5.1
Vb5.2
Vb5.3
Vb7.1
Vb7.2
Vb8
Vb9
Vb11
Vb12
Vb13.1
Vb13.2
Vb13.6
Vb14
Vb16
Vb17
Vb18
Vb20
Vb21.3
Vb22
Vb23
% Vβ usage in
CD8+ lymphocytes
WT1ペプチドワクチン施行CML例の末梢血CD8＋T細胞 10
8
6
4
2
0
TCR Vβ
CML例におけるMLPC2週目のWT1テトラマー解析結果
004 YA B2.004
100
CD8-FITC
005 YA B3.005
104
mWT1 tetramer-PE
010 YA B8.010
100
CD8-FITC
CD8-FITC
104
CD8-FITC
104
100
CD8-FITC
104
104
100
CD8-FITC
104
CD8-FITC
CD8-FITC
104
100
CD8-FITC
104
018 YA C6.018
104
023 YA C11.023
100
100
007 YA B5.007
012 YA B10.012
017 YA C5.017
022 YA C10.022
100
CD8-FITC
011 YA B9.011
016 YA C4.016
100
100
006 YA B4.006
104
100
CD8-FITC
CD8-FITC
CD8-FITC
104
013 YA B11.013
100
CD8-FITC
104
019 YA C7.019
104
024 YA D2.024
100
100
008 YA B6.008
100
CD8-FITC
100
CD8-FITC
CD8-FITC
CD8-FITC
104
014 YA C2.014
100
CD8-FITC
104
100
CD8-FITC
104
100
CD8-FITC
CD8-FITC
104
100
CD8-FITC
104
021 YA C9.021
104
026 YA D4.026
104
100
015 YA C3.015
020 YA C8.020
025 YA D3.025
104
100
009 YA B7.009
100
CD8-FITC
104
027 YA D5.027
104
100
CD8-FITC
104
WT1ペプチドワクチンを受けたCML例のMLPC後の
テトラマー陽性well中のCD8+細胞のレパトワ解析
C10 well
mWT1-tetramer
71.0% (/ CD8+ T cells)
Vb5.3
0.00
Vb7.1
1.15
Vb9
0.08
Vb3
0.35
Vb5.2
0.00
CD8
Vb2
0.43
Vb12
0.00
Vb17
0.00
Vb18
0.00
Vb16
0.08
Vb23
0.00
Vb1
1.09
Vb5.1
80.2
Vb13.1
Vb13.6
0.12
0.24
Vb20
0.36
Vb11
0.12
Vb21.3
0.00
WT1特異的TCRの
80.2％がVβ5.1を使用
Vb22
0.25
Vb14
0.25
Vb8
0.00
Vb13.2
0.00
Vb4
13.7
Vb7.2
0.00
WT1ペプチドワクチンを受けたCMLのMLPC後の
テトラマー陽性well中のCD8+細胞のレパトワ解析
C10 well
mWT1-tetramer
71.0%
(/ CD8+ T cells)
CD8
average + 1SD : 20.2
結果3
健常例およびCML例のTCR Vβ の使用分布
健常例およびCML例のTCR Vβ の使用分布
Vβ1、2、5.1、7.1、
Vβ1、3、5.1、7.1、
9、18、21.3、22
Vβ1、5.1、7.1、が健常例、CML例13.6が使用され
が使用されてい
ていた。
で共通して使用されていた。
た。
健常例 (n=14）
CML例 (n=10)
結　果
u  健常例では誘導されたCTLにおいて、TCRVβ 1、2、5.1、 7.1、9、18、21.3、22 が使用されており、Vβ 1、22 が最も高　い頻度で使用されていた。
u  CML例では Vβ1、3、5.1、7.1、13.6 が使用されており、 Vβ 5.1 が最も高い頻度で使用されていた。
u  同じペプチドワクチンを投与した2例において、Vβ1と　Vβ5.1、そしてVβ 7.1 が共通に使用されていることが分　かった。
結　論
u MLPCを用いた抗原特異的細胞傷害性T細胞
（CTL）の増幅は、FACSを用いたVβレパトワの解
析に有用であると考えられた。
u HLA-A*24:02拘束性WT1ペプチド（CYTWNQMNL）
ワクチンによって誘導されたCTLのTCRには、複
数のクローンが存在していることが明らかになった。
共同研究者
² 新潟大学大学院保健学研究科
内山孝由　岩谷俊平　大岩恵理　西澤幹則
² 新潟大学医学部保健学科検査技術科学専攻4年
赤木裕美子　加藤瑞希　神山瑛洋　木曽里奈　高橋周汰
² 新潟大学医学部保健学科
高橋益廣　成田美和子
健常例およびCML例のTCR Vβ の使用分布
健常例 (n=14）
Vβ1、2、5.1、7.1、
9、18、21.3、22 が使用されてい
た。 健常例 + CML例 (n=24)
CML例 (n=10)
Vβ1、3、5.1、7.1、
13.6が使用され
ていた。