EVSecond
エクソソーム精製カラム EVSecond 近年、細胞外分泌小胞（Extracellular Vesicle）であるExosome（エクソソーム）が、がんの転移など様々な疾病 の要因となっていることが示唆されています。そのため、エクソソームはバイオマーカーや生体メカニズム解明の 標的として研究され始めています。しかし、エクソソームはその大きさが生体マトリクス中にあるタンパク質などの 分子サイズと近く、既存の分離手法では単離するのが難しいと言われています。 EVSecondは、エクソソームの高純度精製に特化したサイズ排除クロマトグラフィーカラムです。血清、血漿、細 胞培養上清などから簡単に高品質のエクソソームを単離します。 （EVSecond：Extracellular Vesicle Isolation by Size Exclusion Chromatography on Drip Column） 特長 ・超遠心機などを使用せず、自然落下のみの簡単操作です。 ・試料中のフリーRNAやフリータンパク質を高効率に除去可能なため、 網羅的miRNA解析や高感度プロテオーム解析に適しています。 ・単離されたエクソソームはマイルドにPBS中へ回収されるため、構造 的ダメージもなく、幅広いアプリケーションに使用可能です。 カラムサイズ：全長75 mm 従来法との比較 ・超遠心法やポリマー沈殿法に比べて純度の高いエクソソームが単離できます。 ・特定のエクソソーム表面抗原をキャプチャーする抗体単離法と異なり、表面抗原のプロファイルによらない バイアスの少ないエクソソームの回収が可能です。 GL-SPE EXO フラクションラック 操作方法 操作は全て自然落下で行います。 EVSecond専用のラックです。通液や抽出液の フラクション回収が簡単に行えます。 1. 充填剤をよく混和してスタンドに設置し、保存液を捨てる。 カラム取り付けラック EVSecondを装着します。 2. 0.22 μmフィルターを通した細胞培養用ウシ血清(FBS)で ブロッキング。 EVSecond 3. PBSで6回洗浄。 4. 0.22 μmフィルターを通した血清、血漿などのサンプルを ロードする。(50～700 µL) 5. PBSを適量流し、エクソソーム溶出画分を回収する。 注）初回は抗CD9-抗CD63サンドイッチELISAや、抗CD9ウェスタン ブロッティングなどでエクソソーム溶出位置を確認してください。 回収用ラック 回収用ラックホルダ 回収用ラックを6セット 設置できます。 回収用チューブ（1,5 mL、2 mL） を8本までセットできます。 レバーを引くことで回収用チュー ブの切換が可能です。 大きさ：約 300(W)×300(D)×150(H) mm ヒト血清からのエクソソームの単離 血清や細胞培養上清にはエクソソーム以外に多量のタンパク質や核酸、脂質が含まれています。精製効率が不 十分な単離法を用いるとエクソソーム由来ではないタンパク質やRNA類が共検出され、特に定量的解析結果に 大きな影響を及ぼします。 EVSecondを用いて100 µL、200 µL、300 µL、700 µLのヒト血清からエクソソームを単離しました。（下図） アルブミンやIgGなどの血清タンパク質とエクソソームが精度良く分離できていることが分かります。 Load 100 µL serum Load 200 µL serum Load 300 µL serum Load 700 µL serum 100 µLずつ溶出フラクションを回収 赤：抗CD9-抗CD9サンドイッチELISAによるエクソソーム溶出位置の確認 青：Bradford法による血清フリータンパク質の溶出位置の確認 データご提供：東京大学 植田先生 【価格表】 品名 EVSecond ［冷蔵］ GL-SPE EXOフラクションラック 入数 Cat.No. 価格 10本 5010-21390 44,000 25本 5010-21392 98,000 1式 5010-50450 120,000 注）［冷蔵］は、冷蔵輸送品です。別途、冷蔵梱包費¥1,000を請求させていただきます。 EVSecond製品は、東京大学大学院 新領域創成科学研究科 植田幸嗣先生のご協力により開発されました。 AA941-20150313PDF
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