IVU - I o n i z a t i o n Va r i a b l e Unit- Dream spray, AMR ・・・IVU構成部分 本UnitをESIのアシストガス流路に設置することにより、アシストガスの組成を調製することが可能 になります。例として送り込む窒素にアセトニトリルやイソプロパノール、メタノールなどの気化気体 をESIアシストガスに導入することが可能です。 ⇒N2ラインからの分岐パーツ、チューブ、圧力減圧弁、イオンソース部はIVUに含まれておりません。イオンソース部にアシストガス を導入する構造を持たない場合、別途構成パーツを導入する必要があります。 Charge shiftの例:25 fmol BSA-digest, IVU-Methanol Nano-ESI LC/MS/MS condition Standard IVU-Methanol LC/MS system: LC pump: Auto sampler: ESI source: Flow rate: Analytical Column: Zaplous LC/MS system(AMR) Advance LC(Bruker Michrom) HTS PAL(CTC Analytics) Dream spray(AMR Inc.) 1.2 ul/min C18, 0.2x150, 3um, 120A MS: Orbi Fusion (Thermo) OrbiTrapXL (Thermo) Full MS scan N2/ACN or Methanol 1.38 L/min 25 fmol BSA /100 ng Hela digest Mode: IVU condition; IVU flow rate Sample 25 fmolのBSA-digestをLC/MSによって測定しました(Base peak Chromatogram↑)。数種類のペプチドピークについて価数変化が起きていることを 示しています。 エーエムアール株式会社 東京都目黒区中根2-13-18 第百生命都立大駅前ビル 〒152-0031 TEL: (03)5731-2281 FAX: (03)5731-2283 URL: http://www..amr-inc.co.jp Number of identified proteins, Dream spray Number of identified proteins, Open ESI +27% 300 206 +7% +11% 228 300 200 150 100 150 100 0 100 ng Hela /IVU, N2 100 ng Hela /IVU, N2 and ACN 100 ng Hela /IVU, N2 and Methanol 100 ng Hela /N2 applied 474.23 100 ng Hela /N2 and ACN applied X05Hela3 #2081 RT: 19.53 AV: 1 NL: 1.00E5 T: FTMS + p NSI Full ms [420.00-1600.00] +3 Standard 80 100 ng Hela /N2 and Methanol applied ↑ IVU-導入効果の例:サンプル-100 ng HeLa digest Dream sprayにIVUを導入してタンパク質同定数の増加が認められ た。 X05Hela3 #2084 RT: 19.56 AV: 1 NL: 1.87E2 T: ITMS + c NSI d Full ms2 [email protected] [175.00-1385.00] 430.80 100 100 Standard 90 80 90 No Identified 80 +2 +2 60 40 710.85 711.85 20 60 70 Relative Abundance 70 Relative Abundance Relative Abundance 240 50 ↑ IVU-導入効果の例:サンプル-100 ng HeLa digest オープン型ESIソースにIVUを導入してタンパク質同定数の増加が認 められた。 100 50 686.87 40 687.38 30 445.12 490.78 519.14 701.84 593.16 667.18 686.8 687.0 687.2 687.4 m/z 687.6 687.8 688.0 70 Relative Abundance 701.84 442.73 450 490.78 500 536.17 550 593.16 600 m/z 700 ↑ IVU-メタノール導入効果の例:サンプル-BSA 25 fmol 3価イオンが減少し、2価ピークへの価数シフトが認められた。 741.73 200 70 687.87 z=2 688.36 z=2 687.20 z=? 688.20 z=? 0 687.2 687.4 m/z 687.6 687.8 60 1172.67 1195.53 1000 1327.13 1200 688.0 688.2 1028.05 246.15 430.26 671.00 50 40 345.23 944.20 586.56 573.20 1198.15 815.32 30 20 687.0 800 m/z 1127.01 80 687.37 z=2 40 686.8 600 Protein Identified 90 50 686.6 400 100 60 10 944.32 896.42 964.86 X16Hela #2186 RT: 19.51 AV: 1 NL: 2.88E2 T: ITMS + c NSI d Full ms2 [email protected] [175.00-1385.00] 30 737.30 667.18 650 +2 80 474.23 780.39 572.84 0 688.2 IVU-ACN 686.87 z=2 90 20 0 100 +2 1127.37 586.68 668.63 10 686.6 Relative Abundance +3 60 342.99 267.04 688.38 0 712.35 IVU-Methanol 40 20 X16Hela #2185 RT: 19.50 AV: 1 NL: 1.00E5 T: FTMS + p NSI Full ms [420.00-1600.00] 80 50 687.88 10 722.31 710.84 60 30 20 0 100 40 268 200 50 0 +12% 256 250 Protein ID Protein ID 250 262 557.95 20 782.06 458.26 849.27 10 130 200 400 600 800 m/z 1000 1200 ↑ IVU-アセトニトリル導入効果の例:サンプル100 ng HeLa digest 2価イオンが増加することによりMSMSによってタンパク質が同定された。 IVU-実験評価ご協力: 東京大学先端科学技術研究センター(RCAST) システム生物医学 分子生物医学分野 川村 猛 先生 ⇒IVUによりイオン化ペプチドのチャージシフト効果が期待できます。4価、5価など多価傾向にイオン化するペプチドが2価、3価にチャージシフトするこ とにより、ペプチド/タンパク質の同定数向上が期待できます。または多価シフトによって、分子量の大きいペプチドの同定数向上も期待できます 1)2)3)。 1) Andreas Brekenfeld, Kristina Marx, et al., ASMS 2013, TP716 エーエムアール株式会社 2) Stephanie Kaspar, Pengelley Stuart, et al., ASMS 2013, MP24, #486 東京都目黒区中根2-13-18 3) Matthias Pelzing, Sebastiaan Dolman, et al., ASMS 2012, ThP25 第百生命都立大駅前ビル 〒152-0031 TEL: (03)5731-2281 FAX: (03)5731-2283 URL: http://www..amr-inc.co.jp
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